Podstawowe warunki hodowli komórek
1. Odpowiednia pożywka do hodowli komórkowej
Odpowiednia pożywka do hodowli komórkowej jest jednym z najważniejszych warunków wzrostu i proliferacji komórek in vitro. Pożywka hodowlana nie tylko zapewnia odżywianie komórek i substancje podstawowe do promowania wzrostu i proliferacji komórek, ale także zapewnia żywe środowisko do wzrostu i reprodukcji hodowanych komórek.
2. Wysokiej jakości serum
Obecnie większość podłoży syntetycznych wymaga dodania surowicy. Surowica jest jednym z najważniejszych składników pożywki do hodowli komórkowej, zawierającym różnorodne czynniki wzrostu i inne składniki odżywcze niezbędne do wzrostu komórek.
3. Stała temperatura wzrostu komórek
Aby utrzymać dynamiczny wzrost hodowanych komórek, musi istnieć stała i odpowiednia temperatura.
4. Odpowiednie środowisko gazowe
Gaz jest jednym z niezbędnych warunków przetrwania komórek ssaków, a wymaganymi gazami są głównie tlen i dwutlenek węgla.
5. Temperatura hodowli komórkowej
Aby utrzymać dynamiczny wzrost hodowanych komórek, musi istnieć stała i odpowiednia temperatura. Różne typy komórek mają różne wymagania dotyczące temperatury hodowli. Standardowa temperatura hodowli komórek ludzkich wynosi 36,5 stopnia ± 0 0,5 stopnia. Odchylenie od tego zakresu temperatur wpłynie na normalny metabolizm komórek, a nawet umrze.
6. Odpowiednie środowisko gazowe
Gaz jest jednym z niezbędnych warunków przetrwania hodowli komórek ssaków, a wymaganymi gazami są głównie tlen i dwutlenek węgla. Tlen uczestniczy w cyklu kwasów trikarboksylowych, wytwarzając energię do wzrostu i proliferacji komórek oraz syntetyzując różne składniki potrzebne do wzrostu komórek.
Powszechne zanieczyszczenie kultury komórkowej
1. Zanieczyszczenie bakteryjne
Najczęstsze jest skażenie bakteryjne. Gdy operacja jest nieco niewłaściwa, spowoduje zanieczyszczenie komórek. Po skażeniu bakteryjnym, obserwowany pod mikroskopem będzie wyglądał jak czarne cienkie paski piasku. W kształcie pręcika itp. Po drugie, pożywka staje się żółta i mętna, a na szalce Petriego wyraźnie widać drobne osady w kształcie piasku, a od czasu do czasu pojawia się dziwny zapach.
2. Zakażenie grzybicze
Zanieczyszczony przez grzyby roztwór do hodowli jest przejrzysty i przezroczysty, a nie jak w przypadku dużego ogniska infekcji bakteryjnej, dlatego trudno go wcześnie wykryć. Czasami wygląda jak włókno pod mikroskopem, czasami wygląda jak koral i powoli wyrośnie bardzo cienkie czarne włókno. Kiedy jest już za późno, trudno jest uratować komórki.
3. Zanieczyszczenie pleśnią
Podobnie jak w przypadku infekcji grzybiczych, ponieważ podłoże hodowlane jest przejrzyste, zanieczyszczenie grzybicze jest trudne do wykrycia wcześnie, gdy często jest za późno. W pożywce hodowlanej powoli pojawiały się kłaczkowate zanieczyszczenia, a pod mikroskopem można było zobaczyć unoszące się w wodzie nitkowate obiekty, jak kotki na wietrze. Komórki mogą nadal rosnąć, ale z czasem komórki ulegają degradacji i przestają rosnąć.
4. Zakażenie mykoplazmą
Pożywka staje się mętna. Po zakażeniu komórek przez mykoplazmę zmiany cytopatyczne nie są oczywiste, ale stan komórki pogarsza się i następuje spowolnienie wzrostu. Pod mikroskopem mogą znajdować się małe czarne plamki, ale podłoże hodowlane na ogół nie jest mętne. Po pasażowaniu komórek pojawiły się międzykomórkowe czarne plamki, komórki uległy wakuolizacji, a wiele komórek przypominało apoptozę i martwicę. W końcu komórki unosiły się i całkowicie umierały.
Zapobieganie zanieczyszczeniu komórek
Ustanowienie dobrych zasad i przepisów może znacznie przyczynić się do zmniejszenia zanieczyszczenia komórek. W tym system dostępu, normy operacyjne i system codziennego zarządzania.
System dostępu: w tym personel i materiały. Personel musi zostać przeszkolony, zanim będzie mógł działać samodzielnie i musi spełnić wymagania dotyczące noszenia przed wejściem do laboratorium, takie jak białe fartuchy, fartuchy izolacyjne, maski, rękawiczki itp. sterylizowane i sterylizowane, a zakupione przedmioty należy kupować w stałych i niezawodnych kanałach. Nowo zakupione ogniwa należy przetestować i zweryfikować przed użyciem.
Specyfikacje operacyjne: Najlepiej jest sformułować specyfikacje dla rutynowych operacji, a personel laboratoryjny musi przestrzegać specyfikacji operacyjnych, których nie można dowolnie zmieniać, a także pielęgnować dobre nawyki operacyjne dla personelu laboratoryjnego. Na przykład, po zassaniu końcówki pipety nie zostanie ona ponownie wciągnięta do podłoża, a wystarczająca ilość podłoża zostanie zassana raz. Podczas dodawania płynu, płyn powinien być dodawany w jak największej ilości zawiesiny, co może skutecznie zapobiegać skażeniu mykoplazmami i skażeniu krzyżowemu komórek. Ponadto, jeśli to możliwe, operuj tylko jedną linią komórkową na raz i lepiej jest zachować mały odstęp między komórkami, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego.
System codziennego zarządzania: Obejmuje zasady i metody użytkowania, czyszczenia i konserwacji środowiska oraz materiałów eksploatacyjnych, odczynników itp. Istnieje również zarządzanie zużyciem, zapasami i zakupami odczynników i materiałów eksploatacyjnych, w tym dwupoziomowe zarządzanie zapasami próbki komórek. W przypadku źródeł skażenia, które nie są łatwe do znalezienia, najlepiej przeprowadzać regularne badania, głównie skażenia mykoplazmami i skażenia krzyżowego komórek.
BHMAM Bio zapewnia odpowiednie materiały eksploatacyjne do hodowli komórkowych:
Jednorazowe plastikowe okrągłe/kwadratowe szalki Petriego:
Polistyren o wysokiej przezroczystości (PS);
Powierzchnia jest gładka i płaska, a pod mikroskopem nie ma zniekształceń optycznych komórek;
Konstrukcja do układania w stos ułatwia układanie i przechowywanie;
Sterylizacja tlenkiem etylenu (EO);
Odporność na zużycie i korozję.
Adherentne traktowanie naczyń do hodowli komórkowych:
Materiał polistyrenowy (PS);
Sterylizacja wiązką elektronów, bez pirogenów, bez toksyn;
Obróbka powierzchni plazmą próżniową, doskonała adhezja komórek;
Powierzchnia jest gładka i płaska, a pod mikroskopem nie ma zniekształceń optycznych komórek;
Konstrukcja z możliwością układania w stosy ułatwia układanie i przechowywanie.
Plastikowe płytki do hodowli komórkowych:
Materiał polistyrenowy (PS);
Nadaje się do normalnej hodowli komórkowej, nieprzylegające płytki do obróbki;
Bez pirogenów, bez toksyn, wysterylizowany;
Łatwe, niezależne opakowanie typu łez, łatwe w obsłudze;
Adherentne traktowanie płytek do hodowli komórkowych:
Materiał polistyrenowy (PS);
Obróbka adherentna (obróbka TC) typ płytki, odpowiednia do hodowli komórek przylegających;
Bez pirogenów, bez toksyn, wysterylizowany;
Łatwe, niezależne opakowanie typu łez, łatwe w obsłudze;
Wszystkie mają płaskie dna.
Adherentne traktowanie kolb do hodowli komórkowych:
Materiał polistyrenowy (PS);
Sterylizacja wiązką elektronów, bez pirogenów, bez toksyn;
Obróbka powierzchni plazmą próżniową, doskonała adhezja komórek;
Oddychający pokrowiec, który sprzyja wymianie gazowej i zapobiega przedostawaniu się drobnoustrojów.
Kriofiolki wirowe wewnętrzne/zewnętrzne:
100% czysty materiał polipropylenowy (PP);
Może wytrzymać sterylizację 15psi, 121 stopni;
Ścianka tuby jest pogrubiona, a korpus tuby ma skalę i obszar do pisania;
Pomiędzy gwintem osłony rury a korpusem rury znajduje się silikonowa uszczelka pierścieniowa zapewniająca szczelność;
Bez DNazy, bez RNazy, bez pirogenów, bez endotoksyn.
