ELISA ze złym wynikiem?Podążaj za nami, aby wybrać odpowiednią płytkę Elisa.
Wybór odpowiedniej płytki ELISA jest pierwszym krokiem do udanego eksperymentu ELISA, ale wiele osób to ignoruje. Kiedy ludzie przeprowadzają eksperymenty, często biorą pod uwagę tylko sam eksperyment, ale nie wiedzą, że produkt często ma duży wpływ na eksperyment. Właściwy dobór produktów przyczyni się do powodzenia eksperymentu. Podczas przeprowadzania eksperymentów ELISA zwykle bierzemy pod uwagę następujące czynniki:
1. Kształt dna
Obecnie producenci projektują dołki znakowane enzymem jako niezależne kolumny i odpowiednio zwiększają odległość między dołkami, aby można je było rozdzielić niezależnie, minimalizując w ten sposób zanieczyszczenie krzyżowe. Różne typy płytek Elisa mają różne kształty dna studni. Oto kilka typowych kształtów dna otworu:
Płaskie dno: dno jest poziome, nazywane również dnem F. Światło nie będzie odbijane przez dno, które w największym stopniu może przepuszczać światło. Używaj do eksperymentów, które wymagają zaokrąglonego dna ze względu na widoczność lub z innych powodów.
Okrągłe dno: znane również jako U-bottom, zapewnia najlepsze wyniki czyszczenia i wydajność hybrydową, odpowiednie do zastosowań, które wymagają testowania osadów.
C-bottom: może zapewnić dobry efekt czyszczenia między płaskim dnem a okrągłym dnem, jednocześnie łącząc zalety płaskiego dna.
Stożek dolny: znany również jako V-bottom, nadaje się do precyzyjnego pobierania próbek i przechowywania mikropróbek w celu optymalnego odzyskiwania małych objętości.
2. Kolor płyty Elisa
Dostępne są trzy kolory talerza Elisa: przezroczysty, czarny i biały.
Większość testów ELISA wybiera jako materiały doświadczalne przezroczyste płytki. Białe i czarne płytki Elisa są zwykle używane do wykrywania luminescencji. Sama czarna płytka ELISA pochłania światło, więc jej sygnał jest słabszy niż białej płytki ELISA. Płytki Black Elisa są zwykle używane do wykrywania silniejszego światła, takiego jak detekcja fluorescencji; wręcz przeciwnie, białe płytki Elisa mogą być używane do wykrywania słabszego światła i są często używane do ogólnej chemiluminescencji i wywoływania koloru podłoża (takiego jak podwójna lucyferaza). analiza genu reporterowego).
3. Materiał płyty Elisa
Popularne materiały to polietylen (PE), polipropylen (PP), polistyren (PS), polichlorek winylu (PVC) i poliwęglan (PC).
Najczęściej stosowanymi materiałami w ELSIA są polistyren i polichlorek winylu. Miękka płyta z polichlorku winylu jest cienka, można ją ciąć, a cena jest niska. Wadą jest to, że wykończenie nie jest tak dobre jak płyta styropianowa, a dno otworu nie jest tak płaskie jak styropian. Ale odpowiednia wartość tła również wzrośnie. Zwykle obróbkę przez szczepienie jonowe przeprowadza się na powierzchni płytki ELISA, a aktywne grupy funkcyjne, takie jak grupy aldehydowe, grupy aminowe i grupy epoksydowe, wprowadza się na powierzchnię polimeru, aby poprawić działanie powierzchni podłoża.
4. różne mechanizmy wiązania
Wydajne wiązanie materiału powlekającego z dolną powierzchnią płytki jest kluczowym krokiem w teście ELISA. Dlatego przed eksperymentem należy dokładnie przeanalizować cechy strukturalne i właściwości chemiczne substancji, która ma być powlekana, aby wybrać odpowiednią płytkę Elisa. Ogólnie rzecz biorąc, istnieje kilka sposobów wiązania materiału powłokowego z dnem płytki: adsorpcja pasywna, wiązanie kowalencyjne i wychwytywanie powinowactwa.
Adsorpcja pasywna: Mechanizm adsorpcji pasywnej jest złożony, a wiązanie pomiędzy materiałem powłoki a dnem płytki opiera się głównie na siłach międzycząsteczkowych (siła van der Waalsa) i wiązaniach wodorowych. W większości testów ELISA wiązanie substancji powlekającej z dnem płytki odbywa się przez pasywną adsorpcję. Ogólnie, wiązanie między antygenami (lub przeciwciałami) o średniej i dużej masie cząsteczkowej a dnem płytki odbywa się przez pasywną adsorpcję. Przy wyborze płytki Elisa często bierze się pod uwagę hydrofobowe/hydrofilowe właściwości dolnej powierzchni płytki. Poniższa tabela przedstawia zakres zastosowania i zastosowanie różnych hydrofilowych powierzchni podłoża:
hydrofilowy | Wiązanie priorytetowe | Główne zastosowanie |
- | Cząsteczki zawierające znaczące regiony hydrofobowe, takie jak: lipidy, lipoproteiny, duże białka | Antygen ELISA, FlA, LIA |
plus | Biocząsteczki o właściwościach hydrofilowych/hydrofobowych, takie jak: białka średnie i duże, immunoglobuliny, albumina | ELISA z podwójnym przeciwciałem, ELISA z antygenem |
plus plus | Biocząsteczki o właściwościach hydrofilowych/hydrofobowych, takie jak: białka małe i duże, immunoglobuliny, albumina, LPS, białka fosforylowane, glikoproteiny | Podwójne przeciwciało ELISA, FIA, LIA |
plus plus plus | Glikoproteiny, polarne cząsteczki lipidów, fosfolipidy, kardiolipidy | Antygen ELISA |
Wychwytywanie powinowactwa: Wychwytywanie powinowactwa opiera się na specyficznym wiązaniu znakowanych makrocząsteczek z odpowiadającymi im receptorami. Znakowane makrocząsteczki można otrzymać przez sprzęganie chemiczne lub przez inżynierię genetyczną.
Funkcje Affinity Capture to:
1. wysoka specyficzność
2. Może poprawić stosunek sygnału do szumu wyników pomiarów
Bardziej powszechne powierzchnie dna odwiertu to: powierzchnia pokryta streptawidyną (streptawidyną); powierzchnia pokryta chelatem niklu (chelat niklu) i powierzchnia pokryta glutationem (glutation, GSH).
3. Powierzchnia streptawidyny: Wysokie powinowactwo i specyficzność streptawidyny i biotyny są wykorzystywane do realizacji wiązania dolnej płytki z powlekanym białkiem.
4. Powierzchnia chelatu niklu: Chelat niklu jest przyłączony do powierzchni polimeru w celu związania białek fuzyjnych za pomocą znaczników His (histydynowych).
5. Powierzchnia glutationu: zastosowanie swoistości enzymu i substratu między glutationem a sulfhydrylotransferazą glutationu (GST) w celu uzyskania wiązania dolnej płytki z białkiem płaszcza.
Dlaczego warto wybrać płytę BKMAM Elisa?
Wykonany w 100 procentach z polistyrenu,
Nadaje się do hodowli komórek adherentnych,
Płaska podstawa, równomierna grubość i jednolity rozmiar dla słupów reakcyjnych,
Sterylny w opakowaniu indywidualnym,
Wysoka jakość w cenie fabrycznej.
